蜡笔小新：春日部野生王国

本作主角。在河堤旁進行淨灘活動時，發現了一瓶神秘液體（人類動物化飲料），無意中帶回家卻造成了這次事件的開端。為了救出因動物化而被SKBE抓走的爸爸媽媽，和維多莉亞及動物化的防衛隊成員們潛入了SKBE位於地底的總部。故事尾聲，親自喝下了人類動物化飲料，變成了小象（實際上大小只有絨毛玩具般大），挺身而出面對四膳守。
隨手將「試作版人類動物化飲料」帶了回家，喝了來路不明飲料而動物化的雙親，受到誘惑就喝下動物化飲料的防衛隊們，本作特別強調了全體愚蠢的一面。

小新的媽媽。偶然喝下了小新帶回來的「試作版人類動物化飲料」，而動物化成花豹，因被SKBE視為研究對象而遭活捉。故事後半，和小新再度重逢，不過，她早已完全動物化而失去了人類情感。無法說出人類語言，只能發出低沉吼聲。受到四膳守的攻擊命令撲向小新，其攻擊力道劃破了小新的衣服和包包，足見其已失去人性。而後，因為小新的屁屁讓她恢復人類的意識，便和小新、春日部防衛隊再度前往SKBE基地。由於變成了花豹而感到身形輕盈，戰鬥力也被強化。

小新的爸爸。偶然喝下了小新帶回來的「試作版人類動物化飲料」，而動物化成公雞，被SKBE視為研究對象而遭捉拿，帶著大家逃亡時因雞的習性讓大家落入SKBE的圈套。之後完全動物化並失去人類意識後在最終決戰時恢復了意識，並與小新、美冴一同對抗動物化的四膳守。

小新的妹妹。和哥哥小新與小白一同前往了SKBE總部基地。潛入基地後，因貪玩和小白與隊伍走散。故事尾聲時，因喝下「人類動物化飲料」而動物化成巨大北極熊。在野原一家苦戰動物化四膳守時登場，一口氣逆轉了情勢。

野原家飼養的小狗，曾在分類追捕廣志一行人時協助廣志他們逃亡，後與小新和小葵一同前往SKBE總部基地，後來和小葵與隊伍走散，最後和野原一家一同對抗四膳守。

小新的朋友們。因聽說小新的父母變成了動物，便來到野原家拜訪，卻意外遇上分類和SKBE成員的包圍，最後被SKBE和野原家一同活捉。後靠著維多莉亞的幫忙順利從SKBE手下中逃出，不過，他們卻在途中喝下了「失敗品人類動物化飲料」導致半動物化（風間變為企鵝、妮妮變為兔子、正男變為蝙蝠、阿變為大穿山甲）。之後，和小新一同前往SKBE總部救出被囚禁的廣志和美冴，動物化的防衛隊成員們各自使用其擅長的動物絕活應付困境。

春日部市雙葉里新上任的里長。積極呼籲及推動雙葉里實施極端的環境保護活動，並親力親為進行環境運動的生態學家。但背地裡卻是極端環境保護組織「Save Keeping Beautiful Earth（簡稱SKBE）」的領導人，企圖執行將人類動物化，使其破壞生態環境行為停止的「人類動物化計畫」。親自研發了「人類動物化飲料」，作為全世界實驗的先行階段，讓春日部居民全成了動物。基於極度環保的概念，全身赤裸，僅穿著樹葉丁字褲，完全幾近變態。故事後半，從胯下拿出精華版的「人類動物化飲料DX」並喝下，其幻化成神獸．里昂德斯（獅子身軀，公牛犄角，蛇尾巴，荒鷲羽翼），和小新一家人展開最終決戰。對於環保、節能完全沒有興趣，又揮霍無度的妻子及全人類感到絕望，憤而組成了SKBE進行「人類動物化計畫」。最終和良子和好，並決心兩人共同維護未來地球的環境。日文原名讀音為「自然保護」。

本部電影女主角，小新邂逅的神祕美女，19歲。四膳守的年輕妻子，對於丈夫所熱衷的環境保護活動毫無興趣，當知道丈夫籌備了激進環境保護組織並進行慘無人道的計畫時，決心挺身阻止暴走的丈夫。穿著時髦，全身上下皆為名牌貨，交通工具為美國轎車（曾開到沒油）和摩托車，手榴彈和無反動砲運用自如。性格冷酷，但其無止盡的消費慾望也形成了她浪費、揮霍的習慣（曾將小新心愛的動感超人洗髮精一次用光）。化名為「維多莉亞（ビクトリア）」。仍是恣意妄為的穿金戴銀，曾被小新幻想過她喝下「人類動物化飲料」變為粉紅母象。假名來自小新家毛巾上的字樣「維多莉亞溫泉」。

SKBE幹部之一。故事前半，打算擄走半動物化的廣志和美冴。中年男性，長相像馬為其特徵，本人相當介意。為了貫徹環保意念而半裸，僅著一件由舊報紙作成的三角褲。喜好為將垃圾分類。故事後半，小新等人潛入SKBE總部時，卻被他發現進而追擊。再度發現風間一行人時，因其將垃圾分類的特性成了致命傷，風間一行人趁著空檔，將他推入了大型垃圾處理場。日文原名來自「分別」。

SKBE幹部之一。年輕女性，並未如幹部分類一般「環保的半裸」，而是穿著引人遐想的惹火服裝，包包頭上以數支筷子代替髮簪。號稱「筷子功」世界第一，以兩支巨大筷子為武器，格鬥技巧高超。曾說出「讓動物乖乖回到籠子裡去」的言論，似乎和SKBE的環保理念不符。故事後半，和小新、美冴二人對峙，並一度力壓二人，最後，小新使出「屁屁夾筷功」，花豹美冴把握時機一舉擊潰她。日文原名來自「My箸」。

曾為SKBE所囚禁，並要求他演唱「環保之歌」，不然就得被逼吃哇沙米，是位黑人演歌歌手。故事後半，喝下了動物化飲料成了黑豹，並於春日部街上演唱。並未於電視版本中登場，片段似乎遭到刪減。